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Buvardage à la western

Extrait de Biologie moléculaire, page 227

Figure 14.4 – Buvardage à la western.

Il est parfois nécessaire de déterminer si une protéine particulière est présente dans un échantillon. Ceci est possible grâce à la technique du buvardage à la western (aussi appelée western blot), qui ressemble en plusieurs points au buvardage à la Southern. En effet, alors qu’on identifie un fragment précis d’ADN à l’aide d’une sonde marquée complémentaire par un buvardage à la Southern, le buvardage à la western permet d’identifier une protéine précise présente dans un extrait protéique. Dans ce cas, un anticorps spécifique agit comme sonde pour permettre la détection de la protéine d’intérêt.

A) Les protéines, séparées sur un gel de SDS-polyacrylamide, sont transférées sur une membrane grâce à un courant électrique.

B) Un anticorps spécifique à la protéine étudiée est incubé avec la membrane, et on enlève l’excès avec à des lavages.

C) Un anticorps secondaire, qui reconnaît l’anticorps primaire, est incubé avec la membrane, puis on lave l’excès. Ce deuxième anticorps est couplé à une enzyme, ce qui permet de révéler l’emplacement de la protéine étudiée à l’aide d’un substrat colorimétrique (ou détecté d’une autre façon).

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Date : 2006
Auteur : Joëlle Brodeur, Martin Toussaint,  Projetbleu
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Ayant droit : CCDMD
Catégorie : Pédagogie
Numéro : 55591

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