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Sondes Taqman

Extrait de Biologie moléculaire, page 149

Figure 9.7 c – Méthodes de détection de l’ADN amplifié.

Une autre méthode de détection fréquemment utilisée est celle des sondes Taqman, commercialisées par la compagnie Roche. Cette technique repose sur l’activité 5’ exonucléase de la Taq polymérase. Les sondes Taqman sont composées d’une séquence spécifique à une portion centrale du fragment d’ADN amplifié, d’un fluorophore habituellement en 5’ de l’amorce et d’un extincteur (quencher) habituellement en 3’ de l’amorce. Selon le principe du FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer), lorsque la molécule est excitée, le fluorophore transfère une partie de son énergie à l’extincteur ou émet de la fluorescence, selon la distance entre les deux molécules. L’extincteur, lorsqu’il se trouve à proximité du fluorophore, empêche ce dernier d’émettre un signal fluorescent. C’est donc en l’absence de FRET qu’il y aura émission d’un signal fluorescent. Dans un mélange réactionnel d’un PCR (réaction de polymérisation en chaîne) en temps réel, la sonde Taqman s’hybride sur l’ADN cible, et lorsque la polymérase à ADN l’atteint, son activité exonucléase clive le fluorophore et dégrade la sonde. La molécule fluorescente est alors libérée de l’effet de l’extincteur, et l’on peut mesurer un signal fluorescent correspondant à ce fluorophore. Le signal émis dépend donc de la polymérisation par l’enzyme : il y a clivage du fluorophore seulement au moment de l’amplification du fragment cible. Ainsi, plus il y a d’amplification, plus il y a de signal fluorescent.

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Date : 2006
Auteur : Joëlle Brodeur, Martin Toussaint,  Projetbleu
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Ayant droit : CCDMD
Catégorie : Pédagogie
Numéro : 55552

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