Schématisation de la méthode ELISA
Des méthodes d'immunofluorescence servent à la détection d'antigènes de surface caractéristiques de types cellulaires donnés. L'analyse des antigènes peut se faire par la méthode ELISA (de l'anglais enzyme-linked immunosorbent assay), représentée dans la figure ci-contre.
Cette méthode permet de révéler la présence de protéines particulières par une réaction antigène-anticorps.
1) Des anticorps de capture sont placés dans les puits d'une plaque multipuits.
2) Ensuite, des extraits de protéines cellulaires, contenant les protéines produites par la population de cellules, sont ajoutés aux puits. Lorsque les extraits contiennent les protéines cibles, celles-ci se lient à l'anticorps de capture.
3) Pour en révéler la présence, il suffit d'ajouter un anticorps primaire qui se lie à la protéine ciblée en raison de son affinité.
4) Un anticorps secondaire conjugué à une enzyme se lie par la suite à l'anticorps primaire.
5) Enfin, un substrat de l'enzyme est ajouté et
6) une réaction enzymatique, causant un changement de coloration, se produit. Les puits dans lesquels la coloration de la solution a changé contiennent la protéine d'intérêt, qui peut ainsi être quantifiée selon l'intensité de la coloration.
Figure 7.6 du manuel Culture cellulaire animale et végétale, d'Antoine Campeau-Péloquin et Sophie Roy.
Localisation : Cégep de Saint-Hyacinthe, 3000, avenue Boullé, Saint-Hyacinthe, Québec
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Date : 2019
Auteur :
Antoine Campeau-Péloquin, Sophie Roy, Gilles Chabot (illustration)
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Ayant droit :
CCDMD
Catégorie : Pédagogie
Numéro : 119562
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