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Analyse d'un gène


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Analyse d'un gène

Extrait de Biologie moléculaire, page 253

Figure 15.2 – Analyse du gène FMR1 par buvardage à la Southern.

Il est possible d’évaluer le nombre de répétitions CGG présentes dans le gène FMR1 à l’aide d’une digestion de l’ADN génomique avec l’enzyme de restriction EcoRI, suivie d’un buvardage à la Southern.

A) Extraction d’ADN à partir d’un prélèvement sanguin.
B) Locus génomique du gène FMR1. La digestion avec EcoRI libère un fragment de 5,2 kb à la suite de l’analyse de l’ADN d’un patient normal. Puisque EagI ne reconnaît pas l’ADN méthylé, une double digestion avec EcoRI et EagI permet l’analyse de la méthylation du gène.
C) Patron de bandes obtenu à partir d’une membrane hybridée avec la sonde StB12.3 à la suite d’un buvardage à la Southern d’ADN digéré avec les enzymes EcoRI et EagI. La grand-mère (puits 6) porte la prémutation : des bandes à 2,8 et 3,0 kb sont visibles (le chromosome X actif). Un doublet de bandes, faiblement séparé sur le gel, est aussi obtenu à 5,2 et 5,4 kb (le chromosome X inactif). Le grand-père (puits 5) est sain et produit une seule bande de 2,8 kb. Leur fille (puits 4) est porteuse, mais a une prémutation plus importante que la grand-mère, visible dans la taille un peu plus grande des bandes à environ 3 et 5,4 kb. La petite-fille atteinte (puits 3) présente une traînée de taille supérieure à 5,7 kb, en plus des bandes de 2,8 et 5,2 kb. Le petit-fils atteint (puits 2) produit aussi une traînée de forte taille. Finalement, la petite-fille saine présente les bandes de 2,8 et 5,2 kb des chromosomes X normaux, respectivement actifs et inactifs.



Date : 2006
Auteur : Joëlle Brodeur, Martin Toussaint,  Projetbleu
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Ayant droit : CCDMD
Catégorie : Pédagogie
Numéro : 55585

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