Mini-préparation d'ADN plasmidique
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Extrait de Biologie moléculaire, page 85
Figure 7.3 – Mini-préparation d’ADN plasmidique.
A) Un milieu de culture liquide sélectif est ensemencé avec une colonie provenant d’une bactérie transformée avec un plasmide; après la croissance, la culture est centrifugée et le surnageant est décanté.
B) Le culot de bactéries est resuspendu dans la solution I, puis on ajoute les solutions II, III et du phénol-chloroforme, ce qui permet la lyse alcaline des cellules; les membranes, les protéines et l’ADN génomique perdront leur intégrité. Ceci est suivi d’une précipitation de l’ADN génomique, des protéines dénaturées et des débris cellulaires dans des complexes sel/SDS, alors que l’ADN plasmidique se renature et demeure en solution.
C) La phase supérieure, contenant l’ADN plasmidique, est récupérée.
D) Elle est précipitée à l’aide d’un solvant organique comme l’isopropanol, dans lequel l’ADN est insoluble en présence de sels.
E) Après centrifugation, l’ADN plasmidique forme un culot semi-transparent, mais habituellement visible, qui doit être séché avant la resuspension dans l’eau ou un tampon approprié.
Date : 2006
Auteur :
Joëlle Brodeur, Martin Toussaint, Projetbleu
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Ayant droit :
CCDMD
Catégorie : Pédagogie
Numéro : 55521
Mots-clés
ADN ADN génomique ADN plasmidique bactérie biologie Canada cellule centrifugation chloroforme colonie croissance culot culture liquide sélectif décantation ensemencement éthanol illustration isopropanol lyse alcaline membrane molécule phase aqueuse phase organique phénol-chloroforme plasmide précipitation protéine protéine dénaturée récolte science solution solvant organique surnageant
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