Surexpression et purification ...
23 téléchargement(s)Surexpression et purification d'une protéine
Extrait de Biologie moléculaire, page 87
Figure 7.4 – Exemple de surexpression et de purification d’une protéine.
A) La production de la protéine X est induite par l’ajout de l’IPTG, qui relève l’inhibition du promoteur lacZ. Il y a alors transcription et traduction de la protéine d’intérêt, qui est fusionnée avec une étiquette His.
B) Après la lyse cellulaire, l’extrait contenant toutes les protéines de la cellule est chargé sur une colonne d’affinité (en C), constituée de billes couplées à du nickel.
C) La protéine X reste liée à la colonne de nickel grâce à l’étiquette His, tandis que les autres protéines ne sont pas retenues. Des lavages permettent d’enlever les protéines liées faiblement à la matrice.
D) L’élution avec des quantités croissantes d’imidazole, un analogue de l’histidine, permet de récupérer les protéines liées à la matrice.
Date : 2006
Auteur :
Joëlle Brodeur, Martin Toussaint, Projetbleu
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Ayant droit :
CCDMD
Catégorie : Pédagogie
Numéro : 55520
Mots-clés
ADN bactérie bille biologie Canada cellule colonne d'affinité élution étiquette His extrait cellulaire fusion histidine illustration imidazole induction inhibition IPTG lavage lyse cellulaire matrice molécule nickel nickel-agarose promoteur protéine protéine d'intérêt protéine X purification science surexpression traduction transcription
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